ADN recombinante en la naturaleza 

 La recombinación consiste en la producción de nuevas combinaciones genéticas a partir de las generadas inicialmente por la mutación. Dos moléculas de ADN que posean distintas mutaciones pueden intercambiar segmentos y dar lugar a la aparición de nuevas combinaciones genéticas. Las bacterias y los virus, al igual que los organismos eurcarióticos también tienen mecanismos de recombinación. En el caso de las bacterias existen tres mecanismos de recombinación: transformación, conjugación y transducción. La existencia de estos mecanismos permite la construcción de mapas genéticos en bacterias.

Transformación: en determinadas condiciones fragmentos de ADN exógeno pueden entrar en el interior de las bacterias. El ADN exógeno puede intercambiar segmentos con el ADN del cromosoma principal bacteriano.

Conjugación: transferencia del material hereditario (ADN) de una bacteria donadora a otra receptora. Requiere el contacto físico entre las dos estirpes bacterianas, la donadora y la receptora. El contacto físico se establece a través de los pili-F de la bacteria donadora formándose un tubo de conjugación. El ADN de la bacteria receptora puede intercambiar segmentos con el ADN de la donadora.

Transducción: no necesita del contacto físico entre dos estirpes bacterianas. El vehículo o vector que transporta ADN de una bacteria a otra es un virus.

Al igual que las bacterias, también existen mecanismos que originan recombinación en virus. Cuando dos virus diferentes infectan a la misma bacteria, sus ADNs pueden intercambiar segmentos y, como consecuencia, pueden aparecer partículas virales recombinantes con nuevas combinaciones genéticas.

ADN recombinante quimérico o artificial: Estreptoquinasa recombinante en el ACV

Heberkinasa®
(Estreptoquinasa recombinante)

Las alteraciones de la hemostasis del organismo pueden provocar la formación de coágulos en el sistema circulatorio, que ocasionan desórdenes que llevan a procesos tales como el infarto cerebral. Existe suficiente información sobre el gen, su control transcripcional y su promotor, que han permitido la clonación y la expresión segura de la estreptoquinasa recombinante en bacterias no patogénicas al hombre. La inserción de una construcción genética con el gen de la Sk (estreptoquinasa) y la eritromicina como marcador de selección se introdujo en la cepa de S. equisimilis H46A, con el objetivo de seleccionar clones sobreproductores de la proteína. El aislamiento de S. equisimilis de la secuencia nucleotídica del gen que codifica la Sk y su expresión en Escherichia coli y Pichia pastoris se patentó y se demostró que la proteína obtenida se podía utilizar para el tratamiento de diferentes tipos de trombosis

Bibliografía

Sosa, Iliana, et al. "La eritropoyetina humana recombinante como terapia para la neuroprotección en la isquemia cerebral." Biotecnología Aplicada25.1-2 (2008): 25.

http://elfosscientiae.cigb.edu.cu/PDFs/Biotecnol%20Apl/2008/25/3/BA002503RV216-222.pdf

PCR en tiempo real 

ventajas en el diagnóstico de ECV 

1.  La PCR en tiempo real con transcriptasa inversa (RT-PCR en tiempo real) se ha convertido en el método de elección para realizar un examen rápido y cuantitativo de la expresión de genes específicos, lo que no sería posible con anteriores metodologías. 

2.  Permite valorar no solo la genómica si no también la transcriptómica de un segmento de ADN. La ECV puede tener un origen tanto como una mutación como en un error en la transcripción de varias proteínas que afecten tanto el sistema de coagulación, la estructura histológica de los vasos, entre otras.

3. La PCR en tiempo real puede generar amplicones muy pequeños (desde 60 pb) lo que la hace ideal para la detección de cambios cuantitativos en la expresión génica durante el curso de alteraciones celulares

4. Esta técnica se utiliza para obtener la magnitud de los cambios fisiológicos en los niveles de expresión genética de un gene en estudio en comparación con uno o más genes de referencia

5. Diversos polimorfismos genéticos que afectan al sistema de la coagulación, segmentos que codifican genes como protrombina, plasmin;ogeno, fibrinógeno, angiotensina, fosfodiestrerasa. la PCR en tiempo real mediante genes estandarizados permite detectar los genes que codifican varias proteínas.

Bibliografía 

Vinueza-Burgos C.  PCR en Tiempo Real: la nueva era de la información genética celular. REDVET. Revista Electrónica de Veterinaria 2009, 10 (2). Málaga España

http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=63617114013

Greif G. PCR: Reacción en cadena de la polimerasa. Unidad de Biología Molecular. Institut Pasteur Montevideo

http://www.chlaep.org.uy/descargas/curso_tb_mico_bacterias/reaccion_en_cadena_polimerasa.pdf

http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/pcrtiempo.pdf